CRM-AZA1原多甲藻酸毒素-1（NRC标准品）的制备及分析

CRM-AZA1原多甲藻酸毒素-1（NRC标准品）是从2005年爱尔兰多尼戈尔郡布鲁克斯收集的贝类组织中分离出来的。AZA1的制备提取和纯化在伊利兰海洋研究所进行，最终清洁和纯度检查在哈利法克斯国家研究委员会进行。AZA1的结构和纯度由NMR和LC-MSIMS证实。未检测到明显杂质。使用高分辨率MS，AZA1的[M+H]*测得准确质量为842.5037+/-0.0004（对于C.H-pNO12，A=-1.5 ppm）。图1显示了高分辨率MS产物离子光谱。

通过将纯AZA1溶解在CD中制备储备溶液；OH用于定量核磁共振。通过在脱气的高纯度甲醇中精确稀释qNMR储备溶液来制备CRM溶液。该溶液与聚四氟乙烯搅拌棒和磁力混合器充分混合，同时在氩气氛下的冰浴中冷却。等分样品被分配到干净的氩气弗莱达姆玻璃安瓿中，然后立即用火焰密封。

CRM-AZA1原多甲藻酸毒素-1（NRC标准品）的认证值基于NRC使用两种独立方法获得的结果：使用高纯度咖啡因标准对AZA1储备溶液进行外部校准的定量核磁共振波谱[7]，以及使用中性pH流动相的LC-MS/MS，使用CRM-AQA1（批号20060719）进行校准。值得注意的是，CRM-AZA1-b的认证值是AZA1和差向异构体37-epi-AZA1浓度的总和[8]。用中性流动相柱系统（如图2A所示）从AZA1中分离出差向异构体，但用一些更常用的流动相柱体系（如图2B所示），化合物可能无法分离。根据之前进行的研究，当结合AZA1和37-epi-AZA1的峰面积时，假设了等摩尔响应因子[8]。37-epi-AZA1峰面积约相当于AZA1和37-epi_AZA1总峰面积的3.5%。

同质性

从整个系列中选择了具有代表性的CRM-AZA1-b安瓿（n=21）。通过LC-MSIMS测定，观察到良好的均匀性。AZA1（0.8%）的瓶间均匀性引起的相对不确定度被计算出来，并用于最终的组合不确定度。

不确定性

考虑并量化了与CRM-AZA1-b表征相关的所有合理误差源。包括与所用两种分析方法相关的组合不确定度分量（Jchar）。总体不确定度估计值（UcR）包括与批次特性（Jchar）、瓶间变化（Lhom）和长期储存期间的不稳定性（Jsab）相关的不确定度[9]。表2中列出了这些成分，并按以下方式组合和扩展：

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